免疫组化技术专题第5期之抗原修复液

免疫组化技术专题第5期之抗原修复液

作者:RWD
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通过免疫组化技术专题前几期的内容,我们知道常规石蜡切片标本做免疫组化实验是需要做抗原修复,这就要用到抗原修复液,因为抗原修复液会直接影响抗原修复效果,本期就跟大家一起探讨抗原修复液的PH值、温度和时间等,该如何选择。


抗原修复液


抗原修复液的pH值的选择


1、首先我们知道没有一种抗原修复液能适合于所有的抗体,因为不同pH的抗原修复液其pH比化学成分对抗原修复起到作用更大,虽然多数抗体在抗原修复液全范围pH均能使抗原决定簇进行有效修复,但针对性选择不同pH的修复液,效果会更佳。常见抗原修复液如下:


抗原修复液种类


2、常用的0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)对大多数抗原来说并不是最好的修复液,如进行 ER染色时,用pH7.0比pH6.0要好。


总体看:大部分组织抗原适合的修复液应接近活体细胞的pH(7.0~7.4)。


抗原修复液的温度和时间选择


相较于修复液的种类和pH,对抗原修复影响更大的因素是修复液的温度和时间。建议温度保持在95℃作用时间为15~20分钟。反之温度或时间不够会使染色强度大幅度减弱,甚至呈现阴性结果,影响切片结果的诊断。


温馨提醒


染色失败应主要从抗体质量及操作中找原因。光密度值0.03以下在光镜下看不到棕色颗粒,这些小数值的出现可能是显色液中 DAB在背景中沉着所致。


石蜡切片首选

瑞沃德轮转式(石蜡)切片机S710

石蜡切片机

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