瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

前言

小鼠肝损伤模型是研究肝脏疾病发病机制、药物筛选和治疗策略的重要工具。小鼠肝损伤模型可分为化学性、药物性、免疫性、酒精性等多种类型，每种模型都有其特定的建立方法和评价标准。其中化学诱导造模方法包括：酒精、四氯化碳（CCl4）、对乙酰氨基酚（APAP）、α-萘异硫氰酸酯 (ANIT) 、3，5-二乙氧基羰基-1，4-二氢-2，4，6-三甲基吡啶 (DDC )。其中CCl4诱导的模型，因其操作简便、反应明确而被广泛应用。

CCl4能够在肝脏中经细胞色素P450酶代谢产生自由基，这些自由基能引发脂质过氧化反应，导致肝细胞损伤。通过腹腔注射CCl4，可以在相对短时间内引起明显的肝损伤，且该模型的可重复性好，其形态学和生化特征与人类肝脏疾病相似，是肝坏死及肝硬化疾病发生发展过程研究、药物筛选和疗效评估的理想模型。

材料

1//  实验动物

C57BL/6J，雄性，6–8周龄。

2//  造模试剂

CCl4在橄榄油中稀释，配制0.3% CCl4溶液，使用0.2μm过滤器进行过滤。

3//  注意事项

CCl4在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的2B类致癌物清单中，使用时注意安全防护。

造模方法

急性肝损伤组小鼠10 mL/kg腹腔注射0.3% CCl4，对照组10 mL/kg腹腔注射橄榄油。

动物终点时间：CCl4给药后2、6、12、24、48 h，每个时间点麻醉小鼠，采集血清及肝脏组织等。

模型评估方法

1//  存活率

监测小鼠存活率，存活率随造模时间延长而降低。造模24h后存活率可下降至40%。

2//  血清生化检测：

血清转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)

造模组小鼠血清中血清转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)显著升高，可在造模后24h左右达到最高。

3//  细胞因子测定：TNF-α 和 IL-6

造模组小鼠血清炎症因子TNF-α 和 IL-6显著升高，并随造模时间延长持续升高。

4//  肝损伤的组织学检查

小鼠安乐死后取小鼠肝脏，造模后2h小鼠肝脏轻度损伤，血管周围出现部分细胞坏死。24小时明显出现更严重的肝损伤，可见大面积广泛的细胞坏死，肝脏结构丧失，血管周围有炎症细胞浸润[1]。

瑞沃德切片机在肝脏组织切片中的应用

冷冻切片

(1) 温度设置：箱体-20℃，样本头-15~-18℃。

(2) 小鼠肝脏实切图片：使用瑞沃德FS800冷冻切片机

石蜡切片

(1) 固定：选择适当的固定时间和温度，以确保组织结构的完整性。

(2) 脱水与透明：控制好酒精和透明剂的处理时间，避免过度脱水导致的组织损伤。

(3) 包埋与切片：选择合适的石蜡种类和熔点，保证切片的连续性和完整性。

(4) 染色：染色剂的选择和染色时间的控制对结果影响很大，需要根据实际情况进行优化。

(5) 脱蜡与封片：脱蜡要彻底，封片时要确保切片平整、无气泡。

参考文献：

【1】Zhao L, Jin Y, Donahue K, et al. Tissue Repair in the Mouse Liver Following Acute Carbon Tetrachloride Depends on Injury-Induced Wnt/β-Catenin Signaling. Hepatology. 2019;69(6):2623-2635. doi:10.1002/hep.30563