瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

作者:RWD
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前言

小鼠肝损伤模型是研究肝脏疾病发病机制、药物筛选和治疗策略的重要工具。小鼠肝损伤模型可分为化学性、药物性、免疫性、酒精性等多种类型,每种模型都有其特定的建立方法和评价标准。其中化学诱导造模方法包括:酒精、四氯化碳(CCl4)、对乙酰氨基酚(APAP)、α-萘异硫氰酸酯 (ANIT) 、3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶 (DDC )。其中CCl4诱导的模型,因其操作简便、反应明确而被广泛应用。

CCl4能够在肝脏中经细胞色素P450酶代谢产生自由基,这些自由基能引发脂质过氧化反应,导致肝细胞损伤。通过腹腔注射CCl4,可以在相对短时间内引起明显的肝损伤,且该模型的可重复性好,其形态学和生化特征与人类肝脏疾病相似,是肝坏死及肝硬化疾病发生发展过程研究、药物筛选和疗效评估的理想模型。

材料

1//  实验动物

C57BL/6J,雄性,6–8周龄。

2//  造模试剂

CCl4在橄榄油中稀释,配制0.3% CCl4溶液,使用0.2μm过滤器进行过滤。

3//  注意事项

CCl4在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的2B类致癌物清单中,使用时注意安全防护。

造模方法

急性肝损伤组小鼠10 mL/kg腹腔注射0.3% CCl4,对照组10 mL/kg腹腔注射橄榄油。

动物终点时间:CCl4给药后2、6、12、24、48 h,每个时间点麻醉小鼠,采集血清及肝脏组织等。

瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

模型评估方法

1//  存活率

监测小鼠存活率,存活率随造模时间延长而降低。造模24h后存活率可下降至40%。

2//  血清生化检测:

血清转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)

造模组小鼠血清中血清转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)显著升高,可在造模后24h左右达到最高。

3//  细胞因子测定:TNF-α 和 IL-6

造模组小鼠血清炎症因子TNF-α 和 IL-6显著升高,并随造模时间延长持续升高。

4//  肝损伤的组织学检查

小鼠安乐死后取小鼠肝脏,造模后2h小鼠肝脏轻度损伤,血管周围出现部分细胞坏死。24小时明显出现更严重的肝损伤,可见大面积广泛的细胞坏死,肝脏结构丧失,血管周围有炎症细胞浸润[1]。

瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

瑞沃德切片机在肝脏组织切片中的应用

冷冻切片

(1) 温度设置:箱体-20℃,样本头-15~-18℃。

(2) 小鼠肝脏实切图片:使用瑞沃德FS800冷冻切片机

瑞沃德病理切片机在四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型中的应用

石蜡切片

(1) 固定:选择适当的固定时间和温度,以确保组织结构的完整性。

(2) 脱水与透明:控制好酒精和透明剂的处理时间,避免过度脱水导致的组织损伤。

(3) 包埋与切片:选择合适的石蜡种类和熔点,保证切片的连续性和完整性。

(4) 染色:染色剂的选择和染色时间的控制对结果影响很大,需要根据实际情况进行优化。

(5) 脱蜡与封片:脱蜡要彻底,封片时要确保切片平整、无气泡。

参考文献:

【1】Zhao L, Jin Y, Donahue K, et al. Tissue Repair in the Mouse Liver Following Acute Carbon Tetrachloride Depends on Injury-Induced Wnt/β-Catenin Signaling. Hepatology. 2019;69(6):2623-2635. doi:10.1002/hep.30563


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