如何掌握牙体组织最佳制片方法和技术要领？

作者：RWD

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病理切片方案

牙体组织的主要构成：硬组织——牙釉质、牙本质及牙骨质；软组织——牙髓。软硬结合的特殊性给制片带来了很大的难度。但莫慌莫怕，下面就给大家介绍一种效果较好的牙体组织制片技术。

1、标本处理

步骤：新拔除的牙齿立刻用牙科电机从中间分切成两半，充分暴露牙髓组织，然后放入固定液中固定48-72h，采用10%甲醛液或10%AF液等固定液。

注意：牙髓必须充分暴露，组织固定充分，使组织和细胞保持生活的形态结构，减轻酸性脱钙液对组织的损伤。

2、脱钙处理

通过各种脱钙方法使钙盐溶解、脱出，使牙体变软。这一步最为关键。

1）原则：

① 是否能完全脱钙

② 不损伤组织

③ 不妨碍组织染色

④ 方法简便易操作

2）脱钙剂选择：

在制作脱钙牙切片过程中，主要用酸性试剂脱钙法，脱钙剂主要选用甲酸①和P-R液②，操作简便，脱钙迅速。

3）脱钙时间的把控：

在脱钙过程中，准确掌握脱钙时间十分重要，时间短了，脱钙不充分，则无法切片；时间长了，可能造成组织结构损伤。

4）酸的中和与水洗：

组织经酸类脱钙后，必须用碱性溶液中和组织中的酸性物质，否则会影响染色效果，用5%硫酸锂或硫酸钠处理6-12h，然后流水冲洗6-12h，就可除掉组织中的蜡酸性、碱性及甲醛等物质，使组织的染色效果较好。

3、脱水、透明及包埋

1）脱水步骤：

① 60%→70%→80%乙醇各8~12h

② 95%乙醇共6~8h

③ 100%乙醇共4-6h。必须充分脱水，但高浓度乙醇不应浸泡太长，否则将使组织变硬变脆

2）透明：

透明剂用氯仿效果较好，氯仿 Ⅰ、Ⅱ各1~2h。

3）浸蜡包埋：

蜡Ⅰ（54~56℃）2h→蜡Ⅱ（56~58℃）1~2h→蜡Ⅲ（58~60℃）1~2h。温箱温度应控制在60~64℃之间。过低影响蜡的浸入，过高可使组织变焦。然后用58~60℃的石蜡包埋。

4、切片、染色、封片

切片时刀刃必须锋利，组织与刀刃之间角度不大于5°。HE染色，脱水、透明中性树胶封片。

这样就能制出一张效果较好的牙体组织片子了。

释义：①甲酸：为单纯无机酸类脱钙剂，脱钙速度比无机酸类慢，但对组织损伤轻，染色影响小，一般采用10%-30%浓度（甲酸10-30ml，蒸馏水100ml）。

释义：②P-R液：氯化铝7g + 甲酸5ml+浓盐酸8.5ml+蒸馏水100ml。P-R液为混合脱钙剂，不仅脱钙速度快，而且对组织结构和染色效果都无明显影响。

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