冷冻切片有哪些常见问题?对应的原因及解决方法是什么?

冷冻切片有哪些常见问题?对应的原因及解决方法是什么?

作者:RWD
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冷冻切片有哪些常见问题?对应的原因及解决方法是什么?

在冷冻切片的过程中,你是否也遇到:

  • 切片有划痕
  • 切片厚度不均
  • 组织黏在防卷板上……


想要制作一张高质量的组织切片,不仅需要长期的反复练习,更需要借鉴前人的经验。本期我们将从大家实际冷冻切片中遇见的问题着手,查找原因并给出对应的解决办法。

长期的反复练习


问题01:箱体结霜


  • 原因
1、切片机窗户打开时间过长;

2、机器自身温控性能差。


  • 解决方案
1、不使用机器时注意关好玻璃窗;
2、做除霜处理;
3、瑞沃德冷冻切片机制冷和温控性能可以有效避免结霜问题,同时可设置自动除霜和手动除霜。


问题02:切片发黏


  • 原因

组织、刀片、防卷板都可能温度过高,导致片子回温湿润。


  • 解决方案
1、当机器到达设定温度后,再制冷一段时间再切片,保证箱体内部硬件冻透;
2、适当延长样本冷冻时间或者把样本放在速冻台快速冷冻位点制冷。


问题03:切片开裂,不能正常展开


  • 原因
1、组织过冻,脆性增加;
2、刀片或防卷板上有碎屑或者有细微缺口;

3、组织包埋不规则,有细微隆起。


  • 解决方案
1、调高样本头温度,适当缩短组织冷冻时间;
2、清理防卷板和刀片处,或更换刀片和防卷板玻璃面;
3、再次修片,修出平整截面再切片或重新包埋。


问题04:片子在防卷板上卷曲(进不了防卷板)


  • 原因

防卷板与刀片边沿距离不合适。


  • 解决方案
调整防卷板,使其细微向前移一些。


问题05:样品剐蹭到防卷板


  • 原因
防卷板与刀片边沿距离不合适。


  • 解决方案
调整防卷板,使其细微向前移一些。


问题06:片子有划痕


  • 原因
1、刀片有缺口;
2、防卷板有缺口。


  • 解决方案
1、更换刀片或者侧向位移换新的刀口;
2、更换防卷板玻璃面或侧向位移换新的防卷板区域。


问题07:切片震颤或有杂音


  • 原因
1、组织与样本托之间未冷凝稳固;
2、刀片、刀架和样本头未锁紧;
3、组织过硬且包埋不规则。


  • 解决方案
1、重新用包埋剂将组织与样品托包埋冷冻;
2、检查刀片、刀架和样本头是否锁紧;
3、增加切片厚度。


问题08:切片厚度不均


  • 原因
1、刀架角度不合适,刀片背面有碎屑或结冰,切片速度不一致;
2、刀片和样品头未锁紧;刀架未锁紧。


  • 解决方案
1、通过调整刀架间隙角(出厂默认是5°)从而调整刀片角度,清理刀片锁紧位置和更换刀片,调整切片速度;
2、检查刀片、刀架和样本头是否锁紧。


问题09:组织粘在防卷板上


  • 原因
1、防卷板温度过高或位置不合适;
2、防卷板带静电;
3、脂肪等组织粘在防卷板边沿。


  • 解决方案
1、切片前,防卷板先冷冻一下或调整防卷板位置;
2、更换防卷板玻璃另一侧试试效果;
3、清理防卷板边沿再切片。


问题10:防卷板抬起后,片子卷曲


  • 原因
1、防卷板温度过高;

2、包埋剂包埋不均匀。


  • 解决方案
1、切片前,防卷板先冷冻一下;
2、组织包埋的厚度和形状尽量规则,再用毛笔辅助展片。


问题11:载玻片无法贴片


  • 原因
载玻片温度偏低。


  • 解决方案
1、载玻片温度升高后再贴片;
2、载玻片贴片前放置于箱体外部。

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