AO/PI双荧光染色指南,速戳查看→

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作者:瑞沃德
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台盼蓝染色作为活细胞计数的首选方式,可将细胞膜不完整的死细胞染成蓝黑色,通过在镜下和未被染色的活细胞进行对比并计数,从而可快速了解细胞样品的活率和浓度。但在实际使用过程中,台盼蓝染色计数会出现以下问题:
  • 台盼蓝染色的特异性不强,常会将原代细胞的碎片、PBMCs中残留的红细胞计入总数;
  • 台盼蓝细胞毒性较大,且染料配制浓度无统一标准,导致在进行多样品计数时由于间隔时间过久而结果误差较大。

台盼蓝染色

(台盼蓝染色)


而AO/PI染色法可解决这些问题。AO(Acridine Orange)又称为吖啶橙,PI(Propidium Iodide)又称为碘化丙锭,可分别将DNA染成绿色和红色,而碎片和杂质或哺乳动物红细胞由于没有细胞核不会被染色,同时细胞毒性非常小,所以广泛应用于原代细胞计数、细胞治疗、生物制品等领域

AO PI双荧光染色

(AO/PI双荧光染色)


多数情况下,市面上可以见到很多预配制的染液,细胞样本在染液终浓度为2-25μg/mL时,孵育5–30分钟,将可以发出明亮的核染色荧光。但是实际应用时,由于细胞类型、染色条件以及检测仪器的参数不同,实际呈现的效果也不一样。此时,只需按照下文中提供的染色方案即可获得较为稳定的染色结果


AO/PI快速染色方法


预先配置(50μg/mL PI, 10μg/mL AO)的染色预混液;
吸取10μL细胞样本至EP管中,加入等体积的AO/PI预混染色液,吹打混匀后孵育5min(终浓度25μg/mL PI, 5μg/mL AO);
轻微吹打后,吸取10μL染色后的细胞上样至细胞计数板中进行分析,推荐使用瑞沃德自动细胞计数仪C100/C100-Pro,可精准区分AO/PI双荧光染色后的活死细胞,一键计数,精准快速。

快速染色方法


瑞沃德自动细胞计数仪C100/C100-Pro,除了可用于AO/PI荧光细胞计数,还可广泛适用于细胞计数分析、细胞活力分析、细胞大小分析、检测细胞的转染效率(GFP、RFP)等多重应用场景分析,助你轻松分析细胞数量、活力、大小和荧光强度!


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