第一期线栓MCAO造模技术答疑

第一期线栓MCAO造模技术答疑

作者:RWD
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瑞沃德线栓MCAO造模线上课程圆满结束!此次课程,学员们学习热情高涨,在直播过程中提出了很多问题。这些问题,我们会逐期为大家解答。


讨论区学员们互动积极

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今天为大家准备了第一期答疑,快看你的问题解决了吗?


精选答疑


Q1 如何在活体小鼠颈部区分颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉,线栓从哪个位置进入最合适,为什么会在这个位置最合适?


答:1)从颈正中切口,向下分离组织,在气管旁侧可看到一根较粗的血管,即为颈总动脉,沿着颈总动脉向上分离,可看到Y字型的分叉,其中靠近气管侧较浅的血管为颈外动脉,远离气管侧较深的为颈内动脉,其中颈外动脉一般在颈内动脉上方,颈内动脉一般分布在较深层的地方。


2)从颈外动脉插入线栓更合适:① 能更好的实施再灌注,因为颈总动脉没有被结扎,拔线后血液还可以从颈总动脉进入大脑。② 从颈外动脉进栓可以将颈外动脉直接剪断,但不会对大脑造成缺血性损伤,若从颈总动脉进栓,会导致一侧大脑半球的缺血性损伤,而不是局部缺血性脑损伤。


Q2 从颈总开口入栓,会遇到什么问题,为什么现在比较少见这种造模方法?


答:1)若从颈总动脉进栓,造成的结果不仅仅是大脑中动脉的阻塞,而是整个·动脉的阻塞,会导致整个大脑半球的损伤,而不是局部损伤。这样手术风险较大,不提倡使用。


2)若颈总动脉被结扎,不能很好的实施再灌注。


3)从来没有任何课题组提倡从颈总动脉开口插入线栓。


Q3 常规线栓包含哪些材质?


答:常规线栓包含单丝尼龙线及外层包被的硅胶。


Q4 大鼠可以用哪些仪器检测脑血流,这些仪器都需要如何操作?


答:现在文章中越来越多的利用激光散斑血流成像系统检测小鼠头颅脑血流,其操作相对简单,成像分辨率相对较高(最高可达2048*2048)。


1)激光散斑血流灌注视频系统:激光散斑血流监测视频系统的诞生使以前不可能监测的微循环现象成为可能,血流变化宛如电影一般展现,可以对每个区域、特定时间内血流灌注进行数据分析,不需要在颅骨上打洞。

仅需剪开头皮,就可成像观察脑血流。适合批量、高质量实验。


2)激光多普勒血流仪:

a)  首先是确定监测位置:这个取决于实验动物的品系和体重、以及缺血模型的种类。切开皮肤,清理颅骨表面筋膜,激光多普勒的穿透深度为1mm左右,皮肤、毛发的存在会完全影响信号,如果是做大脑中动脉缺血模型,检测部位一般在同侧冠状缝后1mm,中线外1-4mm的位置。

b)  麻醉的深浅、麻醉药的选择、其它手术操作都可能影响动物的状态(注意是影响动物的状态,不是影响仪器的监测),如果要得到高质量的数据需要把实验条件标准化,并且对动物的血压进行监测(血压会显著影响微循环血流灌注量)。

c)  尽可能将探头固定在颅骨上。

d) 缺血前、缺血瞬间、缺血后再灌注的血流量要连续监测,由于微循环血管床分布有空间差异性,间断性描记缺血前后血流量会降低实验数据的可信度。

操作相对复杂,不适合批量实验。


Q5 小鼠和大鼠如何避免线栓进入翼腭动脉,如果需要结扎,如何结扎,需要活结还是死结?


答:大脑中动脉阻塞后,翼颚动脉中的血液可能会回流到大脑中动脉中,造成阻塞不完全,将翼颚动脉结扎可以避免这样的事情发生,同时还可以避免手术过程中线拴进入翼颚动脉。翼颚动脉的供血区域有很多的侧枝循环,所以在结扎翼颚动脉时使用活结和死结都可以。


Q6 为何需要结扎颈外动脉?不结扎行吗?


答:插线栓前需要结扎颈外动脉的上端并将其从下方剪断,将颈外动脉的断端翻转过来,便于线栓顺利进入与之相连的颈内动脉。如果不结扎颈外动脉直接剪断的话会造成出血,影响操作视线;如果不剪断颈外动脉的话,线栓就无法进入颈内动脉,所以必须结扎颈外动脉。


Q7 一般线栓可以进入多长?


答:27g-30g的小鼠进拴的长度一般为9.5mm-10.5mm,260g-280g大鼠进拴的长度一般为18-19mm。线栓插入长度要依据动物体重适当调整。


Q8 样本量如何确定具体数值?


答:总体思路:样本量不能太少,必须通过一定数量的重复观测才能把研究总体真实的客观规律性显示出来,并且可以对抽样误差做出客观地估计。但重复观测次数越多(即样本含量越大)试验所要消耗的人力、物力、财力和时间越多,可能会使试验研究成为不可能。而且,样本含量过大还会增加控制试验观测条件的难度,有可能引入非随机误差,给观测结果带来偏性。


考虑因素:(1)  动物生存率和动物模型成本;(2)     实验过程中可能造成的死亡。


具体的样本量选取过程:

(1)  首先确定要观测的指标,实验复杂度;

(2)  确定四个数值:希望发现的最小差异δ,如两总体均数之差、两总体率之差;总体标准差σ的估计值;检验水准α,一般取0.05;II类错误的概率β,一般取0.10或者0.20;

(3)  设计预实验,根据预实验的结果对所需样本数进行估计;

(4)  如果预实验和正式实验的规范一样严格,那么预实验的实验动物数可以计入最终的实验样本总数。


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