免疫组化技术专题第2期之如何选择抗体?

免疫组化技术专题第2期之如何选择抗体?

作者:RWD
浏览量:1750

上一期,我们详细介绍了免疫组化染色操作步骤和关键物质两方面内容,这期作为免疫组化技术专题第2期,我们将与大家交流抗体相关内容。


抗体的定义


抗体是一种蛋白质,也叫免疫球蛋白(Ig),根据在血浆或血清中含量的降序排列,可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等五类。


抗体是具有4条多肽链的对称结构,其中较长且相对分子量较大的相同2条肽链,称为重链(H链);较短且相对分子量较小的相同2条肽链,称为轻链(L链)。


链间由二硫键和非共价键联结,形成一个由4条多肽链构成的单体分子。重链决定分子的类型和亚型(因为其在抗原性和结构特性上的差异),轻链有κ和λ两种,k和λ链的种类在所有免疫球蛋白类型、亚型以及不同的种群中均有所不同。


免疫组织化学最常用的抗体是IgG和IgM。


何为单/多克隆抗体呢?


单克隆抗体是由单一B细胞(浆细胞)产生的具有免疫化学特异性并与抗原的特异性决定簇反应的抗体,简单来说就是高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。小鼠是目前最常用的单克隆抗体的输出动物。


在免疫组化中,单克隆抗体因具有高同源性、高特异性、没有批间变异性、易于描述等特点,所以要优越于多克隆抗体。但在单克隆抗体应用时也存在一些缺陷,应予以注意。


多克降抗体,简言之即单克隆抗体的集合体,是由多种抗原决定簇刺激机体所产生的,相应地就会产生各种各样的单克隆抗体。这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,结果导致在免疫化学性质方面的差异。兔子、羊、猪、马、豚鼠等是目前最常用的多克隆抗体的输出动物。兔子易养护且与不同兔子的多克隆抗体池无明显批间差异的特性,使得兔子成为最常用于多克隆抗体制备的物种,比如新西兰白兔。


何为一抗和二抗?


第一抗体就是能和非抗体性抗原(也称特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。


第二抗体是能和第一抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测第一抗体的存在,放大第一抗体的信号。


应该如何选择抗体?


1、一抗选择要点


(1)根据需要检测的抗原选择单/多克隆抗体,需要检测单一特异抗原的时候选择单克隆抗体,检测多特异性抗原的时候选择多克隆抗体。前面说过,单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,在抗原抗体反应中,检测抗原灵敏度相对较低;多克隆抗体虽然特异性弱,但亲和力强,检测抗原灵敏度高,然而容易出现非特异性染色。

(2)明确种属来源,要与二抗的来源相匹配。前面提过,兔子是多克隆抗体的常见输出动物,而小鼠多用于产生是单克隆,但也有例外。

(3)明确一抗可检测的抗原种属,可查阅说明书。

(4)明确能否用于免疫组化。可查阅一抗说明书,建议选择有明确说明的抗体。

(5)依据检测样本类型进行选择。一般能做石蜡切片的抗体,可能都可以用来检测冰冻切片,但能做冰冻切片的抗体,不一定能检测石蜡切片中的抗原。


2、二抗选择要点


(1)明确种属来源。二抗是一抗的抗体,所以二抗的来源主要根据一抗种属来源来决定,如一抗是小鼠来源,那二抗就选择抗小鼠的即可。

(2)根据检测方法选择相应标记物的二抗,常见的免疫组化检测方法有:免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。

(3)IgM和IgG的选择。一般来说一抗和二抗选择类型一样。


收藏 点赞(0)
分享
评论列表共有 0 条评论
暂无评论
在生命科学、动物健康和临床医疗领域提供可信赖的解决方案和服务,全力帮助客户取得成功