免疫组化技术专题第2期之如何选择抗体？

作者：RWD

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上一期，我们详细介绍了免疫组化染色操作步骤和关键物质两方面内容，这期作为免疫组化技术专题第2期，我们将与大家交流抗体相关内容。

抗体的定义

抗体是一种蛋白质，也叫免疫球蛋白（Ig），根据在血浆或血清中含量的降序排列，可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE等五类。

抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中较长且相对分子量较大的相同2条肽链，称为重链（H链）；较短且相对分子量较小的相同2条肽链，称为轻链（L链）。

链间由二硫键和非共价键联结，形成一个由4条多肽链构成的单体分子。重链决定分子的类型和亚型（因为其在抗原性和结构特性上的差异），轻链有κ和λ两种，k和λ链的种类在所有免疫球蛋白类型、亚型以及不同的种群中均有所不同。

免疫组织化学最常用的抗体是IgG和IgM。

何为单/多克隆抗体呢?

单克隆抗体是由单一B细胞（浆细胞）产生的具有免疫化学特异性并与抗原的特异性决定簇反应的抗体，简单来说就是高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。小鼠是目前最常用的单克隆抗体的输出动物。

在免疫组化中，单克隆抗体因具有高同源性、高特异性、没有批间变异性、易于描述等特点，所以要优越于多克隆抗体。但在单克隆抗体应用时也存在一些缺陷，应予以注意。

多克降抗体，简言之即单克隆抗体的集合体，是由多种抗原决定簇刺激机体所产生的，相应地就会产生各种各样的单克隆抗体。这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，结果导致在免疫化学性质方面的差异。兔子、羊、猪、马、豚鼠等是目前最常用的多克隆抗体的输出动物。兔子易养护且与不同兔子的多克隆抗体池无明显批间差异的特性，使得兔子成为最常用于多克隆抗体制备的物种，比如新西兰白兔。

何为一抗和二抗？

第一抗体就是能和非抗体性抗原（也称特异性抗原）特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。

第二抗体是能和第一抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测第一抗体的存在，放大第一抗体的信号。

应该如何选择抗体?

1、一抗选择要点

（1）根据需要检测的抗原选择单/多克隆抗体，需要检测单一特异抗原的时候选择单克隆抗体，检测多特异性抗原的时候选择多克隆抗体。前面说过，单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，在抗原抗体反应中，检测抗原灵敏度相对较低；多克隆抗体虽然特异性弱，但亲和力强，检测抗原灵敏度高，然而容易出现非特异性染色。

（2）明确种属来源，要与二抗的来源相匹配。前面提过，兔子是多克隆抗体的常见输出动物，而小鼠多用于产生是单克隆，但也有例外。

（3）明确一抗可检测的抗原种属，可查阅说明书。

（4）明确能否用于免疫组化。可查阅一抗说明书，建议选择有明确说明的抗体。

（5）依据检测样本类型进行选择。一般能做石蜡切片的抗体，可能都可以用来检测冰冻切片，但能做冰冻切片的抗体，不一定能检测石蜡切片中的抗原。

2、二抗选择要点

（1）明确种属来源。二抗是一抗的抗体，所以二抗的来源主要根据一抗种属来源来决定，如一抗是小鼠来源，那二抗就选择抗小鼠的即可。