针对胰腺组织,如何有效提高切片质量?

针对胰腺组织,如何有效提高切片质量?

作者:RWD
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近期有不少同学问到胰腺组织切片问题,切出来的片子要么组织没有切下来,要么切的片子碎裂或者空洞。我们都知道胰腺组织主要组成部分是胰腺小叶、结缔组织和脂肪,结构松散,同时胰液含量高,增加了石蜡制片的难度。
所以一般会出现组织处理不当的情况,比如:
脱水不足(组织带不下来,组织完整性无法保证),切片时组织容易碎;
摊片困难(组织容易散开)等问题。

每个环节流程都会出现问题,比如固定液选择不合适,固定出问题,那片子着色效果差,出现灰蓝色或伊红色。接下来就与大家分享一些前人的指导和自身的经验,一起交流探讨一下胰腺组织的切片技巧。


操作方法
1.取材:取材尺寸建议为15mmx15mmx5mm,且要尽早取,因为离体胰腺组织容易出现自溶,结构遭到破坏。取材后马上固定;
2.固定:固定液采用10%的碱性甲醛溶液①中固定24h,在组织脱水前投入AAF液补充固定20min;
3.脱水:步骤如下:70%乙醇和80%乙醇各1h,然后95%乙醇两道各2h,100%乙醇两道各40min,最后正丁醇三道各2h。
4.包埋切片:60℃浸蜡三道共4h,切片厚度建议为3-4μm;
5.脱蜡:步骤如下:二甲苯两道各10min,无水乙醇两道各5min,95%乙醇5min,80%乙醇2min,70%乙醇1min,最后水洗;

6.染色:常规HE染色操作即可,最后固定封片。


优势
1.首先10%碱性甲醛溶液固定液有效地保存了胰液的化学性质,该固定液具有助染作用,然后AAF液对胰腺组织进行加强固定,组织固定均匀,有利于切片和染色。
将AAF液中的95%乙醇改为80%乙醇,减轻了对组织的高收缩和硬化作用,同时也起到与甲醛协同固定及脱水作用。
2.正丁醇是一种组织透明剂,特别适合胰腺组织制片。而常规制片方法中的二甲苯透明能力虽然很强,但组织在二甲苯中浸泡时间长较易发生过度收缩和脆化现象,组织块切片时易碎。
所以采用正丁醇取代二甲苯作为透明剂,可较少引起胰腺组织块的收缩与变脆,可使组织韧性增加,有效避免组织裂纹,可直接与石蜡互溶,经正丁醇处理的组织较柔软,有助于提高切片质量。
3.胰腺组织浸蜡一般60℃石蜡为宜,溶蜡62℃。因此,改进的胰腺组织制片方法具有实用性,值得借鉴。
只有不断在实践中应用和总结,才能优化和提高制片技术,保证切片质量,从而保证阅片诊断效果。
注释:①10%的碱性甲醛溶液:甲醛10ml+蒸馏水90ml+碳酸钠1~2g

【参考文献】病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越,陈军主编.人民卫生出版社


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