针对胰腺组织，如何有效提高切片质量？

作者：RWD

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病理切片方案

近期有不少同学问到胰腺组织切片问题，切出来的片子要么组织没有切下来，要么切的片子碎裂或者空洞。我们都知道胰腺组织主要组成部分是胰腺小叶、结缔组织和脂肪，结构松散，同时胰液含量高，增加了石蜡制片的难度。
所以一般会出现组织处理不当的情况，比如：
脱水不足（组织带不下来，组织完整性无法保证），切片时组织容易碎；
摊片困难（组织容易散开)等问题。

每个环节流程都会出现问题，比如固定液选择不合适，固定出问题，那片子着色效果差，出现灰蓝色或伊红色。接下来就与大家分享一些前人的指导和自身的经验，一起交流探讨一下胰腺组织的切片技巧。

操作方法

1.取材：取材尺寸建议为15mmx15mmx5mm，且要尽早取，因为离体胰腺组织容易出现自溶，结构遭到破坏。取材后马上固定；
2.固定：固定液采用10%的碱性甲醛溶液①中固定24h，在组织脱水前投入AAF液补充固定20min；
3.脱水：步骤如下：70%乙醇和80%乙醇各1h，然后95%乙醇两道各2h，100%乙醇两道各40min，最后正丁醇三道各2h。
4.包埋切片：60℃浸蜡三道共4h，切片厚度建议为3-4μm；
5.脱蜡：步骤如下：二甲苯两道各10min，无水乙醇两道各5min，95%乙醇5min，80%乙醇2min，70%乙醇1min，最后水洗；

6.染色：常规HE染色操作即可，最后固定封片。

优势

1.首先10%碱性甲醛溶液固定液有效地保存了胰液的化学性质，该固定液具有助染作用，然后AAF液对胰腺组织进行加强固定，组织固定均匀，有利于切片和染色。
将AAF液中的95%乙醇改为80%乙醇，减轻了对组织的高收缩和硬化作用，同时也起到与甲醛协同固定及脱水作用。
2.正丁醇是一种组织透明剂，特别适合胰腺组织制片。而常规制片方法中的二甲苯透明能力虽然很强，但组织在二甲苯中浸泡时间长较易发生过度收缩和脆化现象，组织块切片时易碎。
所以采用正丁醇取代二甲苯作为透明剂，可较少引起胰腺组织块的收缩与变脆，可使组织韧性增加，有效避免组织裂纹，可直接与石蜡互溶，经正丁醇处理的组织较柔软，有助于提高切片质量。
3.胰腺组织浸蜡一般60℃石蜡为宜，溶蜡62℃。因此，改进的胰腺组织制片方法具有实用性，值得借鉴。
只有不断在实践中应用和总结，才能优化和提高制片技术，保证切片质量，从而保证阅片诊断效果。
注释：①10%的碱性甲醛溶液：甲醛10ml+蒸馏水90ml+碳酸钠1~2g

【参考文献】病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越，陈军主编.人民卫生出版社

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