如何用石蜡切片机获得脂肪组织与硬质性瘤组织的切片?

如何用石蜡切片机获得脂肪组织与硬质性瘤组织的切片?

作者:RWD
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病理制片中,有些组织是必须经过一些特殊处理才能达到满意的制片效果,这些组织由于其特殊的结构,需要采取不同的处理方法。本期瑞沃德将为大家分享脂肪组织与硬质性瘤组织的制片方法。


如何用石蜡切片机获得脂肪组织与硬质性瘤组织的切片?


一、脂肪组织的制片方法?有哪些技术要领需要掌握?


脂肪组织结构较特殊,在制片过程中应调整试剂和制片过程中各步骤的时间,所制脂肪组织切片应染色鲜明,结构完整,利于诊断。

经典方法

1、固定:10%甲醛或AF固定液


2、脱水

75%乙醇(120分钟)

80%乙醇(90分钟)

95%乙醇(90分钟)

无水乙醇Ⅰ(60分钟)

无水乙醇Ⅱ(60分钟)

无水乙醇Ⅲ(60分钟)

3、透明

二甲苯Ⅰ(30分钟)

二甲苯Ⅱ(30分钟)

二甲苯Ⅲ(20分钟)

浸蜡:56-58℃

浸蜡Ⅰ(120分钟)

浸蜡Ⅱ(120分钟)

浸蜡Ⅲ(120分钟)

4、包埋:韧性较强石蜡包埋


5、切片:应用较锋利刀片切制,切片厚度应较普通切片厚,大约在5-6µm


6、染色:染色时间应稍有延长


预处理制片法

1、取材切取得脂肪组织放入100ml广口瓶内,加入丙酮50ml

2、再将装有脂肪组织和丙酮的广口瓶置于超声波人体组织快速处理仪上水浴加温,开启超声波,温度设置64℃,温度升至64℃开始计时,处理60分钟(此时见脂肪组织颜色变浅,体积缩小)

3、经处理后的脂肪组织与其他外检组织一起用常规制片法使用的脱水机、脱水剂、透明剂浸蜡同石蜡完全相同,采用的步骤、方法、时间一致,进行脱水、透明、浸蜡、包埋

4、切片:切片厚度4-6µm,烤片温度为60℃,烤片时间60分钟

5、染色用HE染色法

技术要点

1、固定对于制作脂肪组织切片至关重要。送检的脂肪组织标本,如若作HE染色则应立即投入到新鲜的4%的中性甲醛液中,如此处理的组织柔韧性好,收缩小,固定均匀,而AF液中的高浓度乙醇在高温下会使组织表面蛋白质迅速凝固,组织收缩,阻止甲醛向深部渗透而致固定不均匀,临床送检的新鲜脂肪组织如若不经固定,直接取材投入于脱水机中,将导致脱水和浸蜡不足,无法切片。如若需显示脂肪而作特染时,需用加钙的固定液固定,且固定时间宜长,以2~5周为宜,以利脂质的保存。

2、脂肪组织的脱水应从低浓度乙醇开始,在无水乙醇中时间应适当延长到4小时左右,使组织彻底脱水,在入二甲苯之前在无水乙醇和二甲苯的混合液中处理30分钟效果更佳。如作特染时为保存脂质置于乙醇和二甲苯等溶剂中的时间则宜短

3、采用Waxin透明剂效果更好,处理时间虽有延长,但对脂肪的浸透效果更佳,使浸蜡更完全,切片更好切制

4、三氯甲烷有很好的脱脂作用,更有利于脂肪组织的脱水和透明浸蜡的效果

5、浸蜡最好用56-58℃熔点的蜡,浸蜡温度为58℃,此时容器内的蜡是固体蜡和液体蜡的混合液,浸蜡效果最好,蜡熔点过高将致组织出现裂缝,浸蜡可分三步:每步2小时,浸好蜡的组织应立即包埋,不要在空气中暴露过久,否则将使组织和蜡不能紧密融合,出现缝隙。

6、切片时应注意:

a、石蜡组织块放置冰箱时间不宜过长,否则蜡块易开裂

b、开始粗削蜡块时不能切得太厚

c、切片刀要锋利,且切片时若切片不完整,应加大切片时得力度和速度,使蜡片保持完整性和连续性

d、捞片时水温应低一些,以42℃为宜,水温过高,摊片时,蜡片极易向四周散开,不仅捞片困难,且使组织结构松散,不利诊断

e、HE染色时,苏木素染色宜深一些,如需作特殊得苏丹黑B染色时,若组织不是由钙-甲醛固定的,或未经3%重铬酸液时,则染色时间应适当延长。

二、硬质性瘤组织如何制片?有哪些技术要领需要掌握?


病理组织制片质量的优劣直接影响着病理诊断工作,在常规石蜡制片中的硬组织如:平滑肌瘤、皮肤纤维瘤病及其他含纤维成分较多的瘤组织,用常规制片法很难获得满意效果,需要有针对性的技术来应对,在此介绍一种特殊改良方法,可取得很好的效果,供大家参考。

1、标本固定:标本用95%乙醇45ml+10%甲醛溶液45ml+冰酸醋10ml 配制的固定液固定12-24小时

2、标本脱水:标本依次入70%→80%→95%→100%→100%乙醇配制的3%苯酚,各脱1~1.5小时

3、标本透明:正丁醇Ⅰ、正丁醇Ⅱ各透明1.5~2小时

4、标本浸蜡:浸软蜡(56-58℃)2小时,浸硬蜡(60~62℃)4小时

5、标本包埋:用硬蜡60~62℃包埋常规切片

6、标本染色:HE、特殊染色或免疫组化染色

7、结果判定:切片薄而完整,无皱褶挤压现象,组织细胞无明显收缩变形,结构清晰,染色适中。

技术要点

1、取材厚度要均匀一致,厚度不要超过0.3cm

2、浸蜡温度不要太高,一般温度高于蜡熔点2℃为宜

3、染色时因组织致密,纤维丰富,伊红染色时间应相对缩短,苏木素染色时间要适当延长

4、切片时刀要锋利,用力要均匀,无刀口

5、该方法适用于多种硬组织制片,简便易行
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