瑞沃德石蜡切片机在MSU诱导大鼠痛风模型中的应用

瑞沃德石蜡切片机在MSU诱导大鼠痛风模型中的应用

作者:RWD
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前言

痛风是一种由嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少导致的高尿酸血症,进而导致尿酸盐结晶沉积引起的晶体相关性关节炎。痛风的病因可能包括高尿酸血症、嘌呤代谢紊乱、肾脏疾病、药物副作用、酒精滥用等。痛风症状最常见的部位是大拇指关节,典型症状是突然发作的剧烈关节疼痛。

MSU晶体可积聚在关节囊、软骨、骨或其他关节周围组织中,刺激关节滑膜并产生滑膜血管舒张、通透性增加和白细胞渗出等病理反应。通过在大鼠关节腔内注射MSU晶体混悬液可以在较短时间内建立痛风模型,帮助研究疾病的发生发展以及发现新的治疗手段。

实验动物及试剂

1、动物:6-8周龄雄性SD大鼠

2、造模试剂

MSU盐酸钠结晶混悬液:将尿酸钠加入含有3.2% 1 mol/L的NaOH 无菌水中配置成浓度为5mg/mL的混悬液。煮沸溶解后自然降温,调节pH至7.0,溶液呈乳白色后立即离心,将上清反复离心至晶体不再析出,4℃冷却1 h后离心收集晶体。临用前将MSU晶体用PBS稀释得到所需溶度的MSU混悬液。

提示:晶体大小对造模的成功率有比较大的影响。晶体制备好后可在显微镜下测量晶体大小,方便后续进行重复以及评估晶体对模型的影响。

瑞沃德石蜡切片机在MSU诱导大鼠痛风模型中的应用

造模方法

使用RWD小动物麻醉机将动物麻醉后,选择1mL注射器在大鼠后肢一侧踝关节腔或足垫皮内注射。针头进入关节腔有落空感,可回抽验证进针是否准确。

模型评估

1、踝关节周长或脚掌体积测量及行为学观察评分

使用RWD爪肿测试仪测量⽖体积和踝关节肿胀程度,并观察动物行走和静止时造模侧肢体状态进行评分记录。在造模24小时内进行多次测量观察,之后可每天测量1次,连续5-10天。

瑞沃德石蜡切片机在MSU诱导大鼠痛风模型中的应用

2、血清炎症因子检测

使用ELISA试剂盒检测血清中IL-1β、TNF-α、IL-6等常规炎症相关因子水平。

3、组织病理学分析

实验结束后将动物进行安乐死,取造模侧踝关节或脚掌,去除表面软组织,暴露关节部位。组织充分固定后进行脱钙处理,可使用成品的脱钙液,直至组织变软(使用牙签或针头可以轻松扎入骨头)。脱钙完成的组织可制作石蜡切片,使用RWD轮转式切片机进行切片,根据实验需求选择染色方式染色观察。

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