细胞被“黑胶虫”污染了,怎么办?

细胞被“黑胶虫”污染了,怎么办?

作者:RWD
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今天细胞还好吗


正在培养的细胞状态“突然”恶化

在显微镜下观察,感觉有黑点状的不明物体在游动

但没看见悬浮物,也没感觉培养基pH变化速度加快。

是不是支原体?­­

但支原体怎可能在低倍数显微镜下看得这么清楚

难道是它???


科研学术圈一直流传着这样一种生物——它,可以污染细胞,污染后短期内不会影响贴壁生长的细胞贴壁;同时污染后的培养基也不会像细菌、真菌污染之后的培养基迅速变黄浑浊,有菌丝团漂浮在上清中。但是,没有人能确切地说出它到底是原虫还是其他病原微生物,也没有一个标准的图像记录,不管是相机实拍还是扫描电镜,甚至都没人能确定到底是“黑焦虫”还是“黑胶虫”。


“黑胶虫”究竟是什么?


有研究人员通过检测,发现实验室的“黑胶虫”为变形杆菌a-2亚群,其存在于胎牛血清中。


但后又有研究表明“黑胶虫”并非生物,而是一种碳酸钙纳米颗粒或硅复合物,称其为“硅小体”,来源于培养基对玻璃细胞培养器皿的侵蚀。


在“黑胶虫血清”的说法流行后,也有研究者表明自己实验室相似的情况出现原因是由于细菌污染,并从被“黑胶虫”污染的细胞培养基中分离到了一株短波单胞菌属的新菌株[1]。实际上,并不是所有的细菌污染马上就会导致细胞立即死亡,也不是所有的污染会让培养基变黄且浑浊,相反有时细菌污染会让培养基变得更红(细菌分解蛋白质产胺会导致pH值上升因此变红)。


很多人猜测,所谓的“黑胶虫”可能只是凋亡小体或细胞碎片,因为细胞状态好的时候就看不到了,而当颗粒物直径足够小,在液体中做不规则的布朗运动也很正常。尽管到目前,关于黑胶虫究竟是什么仍无定论,但我们应尽量避免“黑胶虫”污染。


如何避免或应对“黑胶虫”污染?


如何做才能避免“黑胶虫”污染?

  • 采用原装进口特级胎牛血清
  • 出现问题的培养体系中的血清,有很多是经过热灭活处理的,热灭活操作会使血清中产生线状的蛋白质聚合体,因其颗粒较小进行布朗运动便被认定为是生物,所以在进行血清融化的过程中要进行梯度处理,最好在4℃缓慢融化。


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如果遇到“黑胶虫”污染怎么办?

  • 换优质胎牛血清
  • 停止热灭活处理血清,目前大部分高品质血清都不需要热灭活操作,甚至通常因为较高温度处理后,血清质量受影响,细胞生长速率降低。同时热灭活过的血清,蛋白等沉淀物的形成显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染。所以在不是做免疫学研究或昆虫细胞培养等特殊场景时,血清尽量不经热灭活。
  • 虽说是“黑胶虫”,但是其实有很大可能性是被其他微生物污染,如果对细胞状态影响很大,正常情况下应该直接丢弃,若细胞非常珍贵,可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔,庆大霉素进行洗涤。并尽早更换品质好的一次性细胞培养耗材以及相关培养试剂


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