离心机的那些事儿,实验室常见离心方法有哪些?

离心机的那些事儿,实验室常见离心方法有哪些?

作者:RWD
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细胞离心是常见细胞实验中不可缺少的一步,它不仅可以使挂壁的样品完全沉降到管底,也可以帮助确认细胞浓度,用于后续的如原代细胞培养、细胞传代培养、单细胞测序等相关实验。


对于不同的细胞/细胞器分离,其离心分离法各不相同,适合的场合也不尽相同。那么常见的细胞离心分离方法都有哪些呢?



差速离心法


差速离心法是利用在离心力场中不同的粒子沉降系数的差别,通过逐渐提高离心力,使非均匀混合液内的不同大小、形状的粒子分步沉淀的离心方法。主要用于实验室样品分离,例如分离细胞器线粒体、叶绿体、蛋白质和病毒等。


分离步骤:  


第一步:设置较低的离心速度(相对离心力),先让较大的颗粒沉降到管底,而混合液中小的颗粒仍然悬浮在上清液中。


第二步:收集沉淀,设置较高的离心速度(相对离心力)离心悬浮液,将较小的颗粒沉降,后续依此类推,最终可分离不同大小的颗粒。


差速离心示意图

▲差速离心示意图


密度梯度离心法


密度梯度离心法又称为区带离心法,可分为速率区带离心法等密度离心法


速率区带离心法:  


主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。离心管内先装入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介质,样品粒子的密度必须大于梯度液柱中任一点的密度,被分离的粒子在梯度液中沉降速度不同,离心时,混合样品中不同的组分将在梯度液柱的不同位置分别形成各自的区带,达到彼此分离的目的。


速率区带离心示意图

▲ 速率区带离心示意图



等密度离心法 :


适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处,并停留在那里达到平衡,从而将不同密度的细胞或细胞器分离。常用介质有Percoll,而CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。



密度梯度离心示意图

▲ 密度梯度离心示意图


以上离心分离法都是比较常见的实验室分离法,皆应用于实验室离心机。随着离心设备的迅速发展,各种离心方法也有了很大的完善和改进。


瑞沃德M1416R高速台式冷冻离心机


瑞沃德M1416R高速台式冷冻离心机,不仅可以应用在细胞的密度梯度离心,还可应用在细胞沉淀,细胞的悬浮纯化;病毒的沉淀及PEG沉淀,病毒的密度梯度离心;蛋白质、核酸分离;生物制品、化学高分子制品、纳米材料纯化处理;临床的血液、体液、排泄物等的分离。应用广泛,性能卓越。


高速台式冷冻离心机


转速可达30000 Xg,在较高转速也可使样品稳定离心

9/10升降速可调节,有利于密度梯度离心

多种转子可选,可实现单管2mL-400mL的离心需求

自锁转子搭配快锁盖子,实现高效转自切换及离心

搭配动平衡实时监测系统,保证样本安全

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