第三期线栓MCAO造模技术答疑

第三期线栓MCAO造模技术答疑

作者:RWD
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第三期线栓MCAO造模技术答疑来了

快来看,你的难题如何解决


精选答疑


1 为何动物行为学上出现了脑梗死,但是TTC染色却无结果?


答:1)TTC试剂过期无效;

2)TTC操作时不规范,没有在室温下避光染色,染色时间过短,没有用盖玻片压;

3)小鼠的代偿功能较强,没有明显的缺氧缺血;

4)在行为学上出现脑梗死,不代表模型成功,归因于操作不规范,没有使用多普勒血流仪器实时监测或者激光散斑检查。


2 MCAO造模栓塞会出现同侧肢体异常,还是对侧肢体异常?一般的行为学标准有哪些?


答:MCAO造模后一般出现对侧肢体异常,因为一侧大脑控制身体对侧的行为活动。


MCAO造模后的行为学评估有两种:

1)Zea Longa法  Zea Longa法为5级0~4分制:0分,无神经损伤;1分,提尾时对侧前肢内收屈曲(轻度神经损伤);2分,爬行时向对侧旋转(中度神经损伤);3分,站立或爬行时,向对侧倾倒(重度神经损伤);4分,无自主活动伴意识障碍。

2)改良的Garcia JH评分  该方法从大鼠自主运动、体态对称性、前肢伸展功能、攀爬运动、身体双侧触觉、双侧胡须碰触反应等6个方面评估大鼠神经功能损伤的程度。分值为3~18分,数值越大,神经功能损伤越轻,18分为正常(如下表)。


Garcia JH评分


3 麻醉对造模有什么影响,常规的造模方法是哪种?


答:麻醉对造模的影响:

1)麻醉能够使得小鼠丧失运动功能,无疼痛反应,有利于术者的操作。

2)麻醉后的小鼠丧失吞咽功能,气管容易淤积痰液,造成小鼠呼吸不畅,严重的会引起窒息。咯痰的小鼠黏膜发白,呼吸微弱。术者可以使用软吸管定时帮助小鼠吸出痰液,避免该情况的发生。

3)麻醉后的小鼠体温会降低,术者可以使用加热垫维持小鼠的体温在37度左右。


目前最常规的麻醉方法是异氟烷气体麻醉,诱导麻醉的浓度为3-4%,维持麻醉的浓度为1.5-2.5%。


4 线栓进入深度与小鼠体重、年龄相关么?如何判断是否进入正确位置?


答:线栓进入深度与小鼠体重和年龄相关。


深度判断:用激光散斑,激光多普勒血流仪,如果是血流下降,下降到20%左右,那就进去到正确位置,如果血流不下来,就不在正确位置。一般小鼠线栓深度为9.5-10.5mm,实际操作时结扎线较松弛,轻轻地一点点往里插栓线,发现栓线被插进去又被弹出来一点点时提示终点,往往把弹出来的一点点再插进去或者插到插不动时才把线扎紧。


5 如何配置肝素钠溶液?


答:纯的肝素10mg能抗凝65-125 ml血液(按1mg等于125单位 , 10 -20单位能抗1ml血液)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等,因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1%肝素生理盐溶液,用时取0.1毫升于试管内, 100 ℃ 烘干,每管能抗凝5-10ml血液。在动物实验作全身抗凝时,一般剂量为:大白鼠2.5-3.0mg / 200-300g体质量。肝素可改变蛋白质等电点,因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时,不可采用肝素。


今天的答疑就到这里了,你的问题解决了吗?


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