新冠研究与类器官技术线上讲座答疑

新冠研究与类器官技术线上讲座答疑

作者:RWD
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瑞沃德举办的新冠研究与类器官培养技术线上讲座圆满结束!对于大家在直播中提出的问题,我们经过整理,并邀请讲师进行了统一答疑,快来看你的问题解决了吗?


精选答疑


1、怎么确定organoid培养成功了?


答:

1)观察细胞是否可以增殖和自我更新,在显微镜下观察是否有3D的细胞团块持续增长。


2)形态是否跟paper中发表的形态一致。


3)免疫荧光染色或者是流式细胞技术检查细胞的类型。


2、原位癌组织怎么培养成类器官?


答:将新鲜的外科手术或者穿刺的样本切碎块,然后使用胶原蛋白酶消化,去除红细胞后,将细胞包裹在matrigel里面,加入特定类型的培养基,持续培养14天左右,隔天换液,观察细胞的长势。不同种类的肿瘤需要使用不同的培养基,可以查阅文献来获得培养基的配方。


3、现在类器官模型面临的技术难题和挑战有哪些?


答:类器官建立的初衷是模拟对应组织的生理功能,但是目前的类器官缺少ECM和免疫细胞,在某些研究领域中,比如肿瘤研究中存在缺陷。


4、3D与2D相比,有什么关键性优点?


答:3D Organoid 更能模拟对应器官的生理功能。比如肺的2D细胞系感染病毒同使用human airway organoid 感染病毒后病毒的replication kinetics 是不同的。3D organoid 得到的实验结果更加真实。同样的结论也可以在药物筛选中得到。


5、类器官的研究如何进行更好的模型验证,验证其与真实组织的相似性?


答:目前3D类器官缺少ECM和免疫细胞,在某些特定类型的研究中是存在缺陷的,所以引入ECM和免疫细胞可能是更接近组织真实性,但是目前的技术上面来讲,很难实现。


6、tumor organoid 和 tumor spheroid 在培养上的关键区别是什么?


答:

两者在细胞培养上的区别:tumor spheroid 不能传代培养。


两者在细胞结构的区别:tumor organoid 具备tumor的结构,而tumor spheroid 只是个细胞聚集在一起的团块。


两者在功能上的区别:tumor organoid 内部没有stroma细胞和免疫细胞,而tumor spheroid 是原代的肿瘤细胞培养得来的,含有部分前面提到的两种细胞。


7、Organoids中是否能形成微血管?


答:不能。


8、肿瘤类器官药敏应该怎么做?药敏实验还需要基质胶吗?


答:肿瘤的药敏性检测是精准医疗的一种,把肿瘤病人的肿瘤组织培养成Organoid,然后检测适合使用哪种药物治疗。这个是Organoid的一个经典应用。在目前报道的文章中,没有使用基质胶。


9、有推荐做类器官基因编辑的方法吗?


答:CRISPR可以用于类器官的基因编辑,效率很高。


10、3D organoid culture如何避免contamination?


答:

对于其他类型细胞比如肿瘤Organoid 中有正常组织的Organoid, 需要使用特定类型的inhibitor 来抑制正常组织的organoid的生长。


对于细菌和微生物的感染,在细胞操作的过程中注意无菌操作,在培养基中加入了用于原代细胞培养的抗生素Promicine 可以有效抑制细菌及微生物的繁殖。


11、单纯从形态上可以区分正常和肿瘤类器官吗?


答:可以从形态上区分。正常的Organoid 形态比较规则,一般是空心的,而肿瘤的类器官一般是实心的。


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