免疫组化技术专题第6期之染色显色操作有哪些注意事项?

免疫组化技术专题第6期之染色显色操作有哪些注意事项?

作者:RWD
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染色显色操作有哪些注意事项


当免疫组化染色实验操作到了显色操作环节,说明之前环节的工作开展都比较顺畅,也因此我们就更不能在染色显色操作环节出现任何失误,否则可能前功尽弃;同时,显色液的污染还存在较大的健康安全隐患。本期就和大家一起交流染色显色液配置及相关注意事项。


显色液配置顺序


在配置显色液之前,必须应严格按照说明书的配置顺序操作,一般的配制顺序是先加蒸馏水,然后加缓冲液,接着是底物H2O2,最后才添加 DAB 显色剂


记得要校正蒸馏水pH浓度(pH=7.0),以确保实验结果的准确性。若出现沉淀,要先进行过滤操作后才能使用。


同时注意现用现配,现配现用。配制好的溶液要避光存放,20 min内有效。另外配制顺序错误也会影响显色效果。


控制显色时间


在做染色操作前,充分观察常规切片和HE染色情况,尽可能找出阳性内对照部位。显色时,一定要在显微镜下控制染色的深浅,以内对照部位出现稍浓于目的色的时间为该片的显色时间。


如果无阳性对照,可选择切片内的红细胞(RBC)为片内对照,一般红细胞(RBC)略微变色即可。


因为不同的抗体、组织、气温、水质等因素都会对显色带来影响,所以显色时间的控制尤为重要,同时具备阳性对照最好。


显色时间可控制在5~15min。如果实验室室温较高,时间需要缩短;室温较低,则需要延长,但注意不能超过15min,不然容易导致背景上色。


避免显色剂污染


DAB显色剂具有致癌隐患,这个问题必须重视,避免污染技术人员、其他人员、科室和实验室环境。


工具专用


因为DAB显色剂会污染,具有致癌隐患,所以配制过程中要注意污染隐患。但为了切实切断污染源头,显色操作所使用的器皿和显微镜要作为专用设备工具。在观察时DAB难免污染显微镜,特别是滴染显色常带着显色液观察,如不专用极易对他人造成污染,并且每次使用完毕的器皿和显微镜要擦洗干净和复位。


尽量避免显色液滴落


镜下控制显色程度时,尽量不要把显色液滴到台面及显微镜上,也不要溅到衣物和皮肤上。


同一地点操作


从显色液的配制到显色操作实验结束,整个操作过程均应在固定的环境和地点进行,如同一操作桌面上进行,这样可以使DAB显色剂的污染面积降到最小,清洗也容易,也不会有外滴风险。


实验废屑的处理


在显色操作过程中难免会有废屑产生,像一些擦拭纸等废弃物,需要定期用硫酸液中和处理后再集中丢弃处理,这也是为了避免污染他人。


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