瑞沃德切片机使用前的样本处理——小动物不同组织取材与固定

瑞沃德切片机使用前的样本处理——小动物不同组织取材与固定

作者:RWD
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前言

动物取材是动物实验中的重要一环,几乎所有的动物实验都需要进行取材观察。

1、药理学研究:在药理学实验中为了评估药物对特定器官或系统的效应,常常需要对实验动物的相关组织进行取材。这包括但不限于心血管系统、神经系统、消化系统和呼吸系统等。

2、毒理学研究:毒理学实验中,通过对动物体内各个器官的取材,可以观察和分析毒性物质对机体造成的 损害程度和机制。

3、病理学研究:在病理学领域,组织取材对于诊断和研究疾病至关重要。通过对病变组织的取材和分析,可以帮助理解疾病的发病机制和发展过程。

4、发育生物学和再生医学研究:在发育生物学和再生医学研究中,组织的取材有助于追踪细胞分化和发育过程中的基因表达模式,以及修复和再生能力。

取材试剂准备

麻醉药:吸入性麻醉药(异氟烷)或注射用麻醉药;小动物安乐死设备。

生理盐水:用于洗组织标本

固定溶液:10%中性甲醛溶液或4%PFA等

取材器材准备

动物固定板,麻醉机或小动物安乐死装置,刀片,镊子(大、小,无齿镊、有齿镊),解剖剪(大、小),止血钳,滤纸,纱布,尺子,固定容器(离心管等),头皮针,注射器等。

解剖取材方法

动物麻醉或安乐死要迅速,避免动物长时间处于应激或濒死状态,增加动物痛苦并造成机体内组织细胞发生变化,由于人为干扰产生假象及病理假象,造成诊断的不准确性,影响实验结果。

以大小鼠为例,动物麻醉或安乐死结束后将动物处于仰卧姿势固定于固定板中,使用酒精对腹部被毛进行擦拭消毒,可根据取材的需求评估是否需要剃毛或脱毛。

沿腹中线剪开动物表皮皮下肌肉层及腹膜层,并向上剪开胸骨暴露胸腹腔脏器。

脏器观察

剖开胸腹腔后先观察动物脏器组织整体情况,以及有无腹水或肉眼可见的病变产生。根据实验目的取出目标脏器,并观察有无病变以及病变部位的形状、色泽、位置、大小及切片等情况。

解剖注意事项

取脏器组织要快速,取材时可在湿冰上操作,并尽快将组织转移至固定液中固定。

脏器组织尽量不使用有齿镊进行夹取,可使用无齿镊夹住脏器周围结缔组织夹取,避免造成人为损伤。

取材使用的剪刀、刀片要锋利。

肝脏及肾脏较大的组织可先切成的块状,固定后再继续切成合适的大小。

较小的组织如腺体垂体等在固定前应平贴于滤纸上,使其在固定后保持较好的形态。

脏器上附有血液、粘液等污染物时,用生理盐水冲洗后再进行固定。

消化系统空腔脏器按胃到直肠的顺序排列沿肠系膜分开后贴于滤纸上再固定,或有些肠道可盘成‘瑞士卷状’进行固定。

皮肤等扁平容易发生卷曲的组织可平摊在滤纸上放置于包埋盒中进行固定。

固定的方法

浸泡固定,将取出的组织浸泡于固定液中。固定液必须足量,一般是组织块总体积的10-50倍,固定时间一般为48-72h,保证固定液充分渗入组织中。脏器组织固定后如果来不及进行脱水包埋,可暂保存于70%乙醇中,长期浸泡在固定液中会影响染色效果。将固定容器放置于较低频率的振荡器上进行振荡,或经常用手工晃动固定容器,加速固定剂向标本内渗透的速度,相对缩短固定的时间,同时使标本固定渗透更加均匀。

固定后的组织取材

肾脏、膀胱:

- 左肾:从肾门处进行横切,切口清晰展示肾门结构。

- 右肾:沿全肾纵切,同时包含肾门,以充分暴露肾盂。

- 膀胱:以膀胱口为中心进行纵切,切口垂直于膀胱轴线。

肝脏、脾脏:

- 肝脏:选择最大叶和最小叶,在肝门处进行垂直切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 脾脏:沿脾脏前缘进行横切,确保切口穿过脾脏主体区域,便于观察脾脏内部结构。

肺、气管:

- 肺:选取左上叶和右下叶,在肺门处进行垂直切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 气管:横切,长度在3-5mm。

胃、十二指肠、派氏结、空肠:

- 胃:从贲门到幽门沿着胃大弯进行纵向切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 十二指肠、空肠:分别进行横向切口,保持切口长度在3-5mm,空肠切口时选择包含派氏结的部分。

回肠、盲肠、结肠、直肠:

- 回肠、盲肠、结肠、直肠:分别进行横向切口,保持切口长度在3-5mm。

甲状腺、甲状旁腺:

- 甲状腺:暴露甲状旁腺从甲状腺后方进行纵向切口,保持切口厚度在3-5mm。

垂体、胰腺:

- 垂体:无需修剪,直接进行横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 胰腺:进行横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

睾丸、附睾:

- 睾丸、附睾:进行横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

唾液腺、颌下腺、颌下淋巴结:

- 唾液腺、颌下腺:进行纵向切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 颌下淋巴结:仅去除多余粘膜,不进行修剪。

骨骼肌:

- 骨骼肌:分别进行横向和纵向切口,保持切口厚度在3-5mm。

坐骨神经:

- 坐骨神经:进行横切。

心脏、主动脉:

- 心脏:从心耳处进行纵向切口,暴露右心房、房室瓣、右心室、左心房等结构,保持切口厚度在3-5mm。

- 主动脉:进行横向切口,保持切口长度在3-5mm。

前列腺、精囊:

- 前列腺、精囊:进行横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

舌头:

- 舌:进行横向切口,去除舌尖部分,保持切口厚度在3-5mm。

皮肤:

- 皮肤:切取一块2x2x0.5cm大小的皮肤样本,以便于观察皮肤的表皮、真皮和皮下组织结构。

肾上腺:

- 肾上腺:对半切开。

眼球、视神经:

- 眼球:对半切开,保留视神经那一半。

脑、脊髓三段:

- 脑:分别进行前脑、中脑、小脑的横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

- 脊髓:分别进行后脑、胸椎、腰椎的横向切口,保持切口厚度在3-5mm。

胸腺、肠系膜淋巴结:

- 胸腺:进行横向切口,保持切口长度在3-5mm。

- 肠系膜淋巴结:只去除多余粘膜,不进行修剪。

组织固定后即可通过脱水、透明、包埋等步骤制成石蜡样本块,使用瑞沃德轮转式切片机进行切片。或经过脱水后包埋使用冷冻切片机进行切片。随后根据实验需求进行染色观察。

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