如何高效进行成年鼠脑单细胞悬液制备

如何高效进行成年鼠脑单细胞悬液制备

作者:瑞沃德
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作为构成神经系统的基本结构和功能单位,神经细胞的体外分离、培养在神经科学研究中占据前沿地位。由于神经元分离后不会再次分裂、增殖,因此在进行相关细胞实验时,需要高效地制备高质量原代神经细胞保证实验材料的供应。


如何高效进行成年鼠脑单细胞悬液制备


然而神经细胞的分离制备难度较大,相较于新生鼠,成年鼠脑的解离更复杂,需要机械和酶解联合作用来降解细胞外基质,同时大量的髓鞘碎片和红细胞也会干扰下游实验。


那么,如何快速制备高质量的大/小鼠神经细胞悬液样本呢?接下来,我们从实验仪器及材料、实验步骤和实验结果一一介绍,希望对你的实验有所帮助。


一、实验仪器及材料


瑞沃德
DSC-400单细胞悬液制备仪;瑞沃德 HJ-400 加热套;瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年脑组织温和酶解试剂盒;瑞沃德 SCT-100组织处理管;70μm 细胞滤器;瑞沃德眼科手术器械;细胞培养耗材、移液枪等。


二、实验步骤


1、按照说明书要求,混合配置酶mix并37℃水浴激活。


2、剥离成年鼠(P>7)脑组织,暂存至盛有HBSS(含Ca2+Mg2+)的培养皿中,用眼科镊轻轻地将脑组织的血管尽可能去除。


单细胞悬液制备 

尽可能剔除脑组织上的血管


3、将脑组织和酶mix放于组织处理管中,用剪刀将全脑简单剪成4块。


4、将组织处理管倒置至单细胞悬液制备仪上,安装加热套,运行程序 M_ABrain_Heater_2。


单细胞悬液制备

单细胞悬液制备仪


5、润湿细胞滤器,过滤细胞悬液样本,300×g ,离心10 min。


单细胞悬液制备 

使用细胞筛过滤杂质


6、转移细胞样本至15mL离心管,加入去碎片试剂后混匀,上层铺预冷的PBS,3000×g, 4℃,升速为5,降速为3,离心10min,保留下层细胞后洗涤收集。


单细胞悬液制备 

去除碎片,收集下层细胞


7、裂红操作(可选)。


8、细胞计数及流式检测。


三、实验结果


单细胞悬液制备


使用瑞沃德单细胞悬液制备仪处理成年小鼠脑组织获得的细胞可达90%,细胞活性高,不影响下游实验。瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年脑组织温和酶解试剂盒,可用于成年大鼠或小鼠(P>7)全脑组织的单细胞悬液制备,可支持脑内所有神经及非神经细胞的分离。

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