单细胞测序前样本处理:看看兔兔的脂肪是什么样的!

单细胞测序前样本处理:看看兔兔的脂肪是什么样的!

作者:RWD
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单细胞测序技术的快速发展为研究脂肪组织的细胞异质性和功能多样性提供了新的机会。然而,在进行兔子脂肪组织单细胞测序之前,需要进行一系列的前处理步骤,以确保测序数据的准确性和可靠性。

本文将重点介绍兔子脂肪组织单细胞测序前处理的关键步骤,包括细胞样品的获取、细胞分离、细胞捕获和RNA提取等。这些步骤的正确执行将为后续的单细胞测序实验提供高质量的样品和数据,为兔子脂肪组织的研究提供有力支持。

材料准备
1、兔子 
2、RWD大小鼠脂肪温和酶解试剂盒 

3、RWD单细胞悬液制备仪 


单细胞测序前样本处理


实操流程

以下为简略步骤

1、取脂肪组织反复用PBS漂洗干净后,用装有 Hanks缓冲液 (含镁)或RPMI 1640的容器暂存组织块,剪成2~4 mm大小的小块,用电子天平称取目的质量的组织块。
注:脂肪组织应现取现用,尽量除去各脂肪组织中可能掺杂的淋巴结、血渍以及多余结缔组织隔膜等。

2、将剪碎的脂肪组织块转移至装有混合酶溶液的组织处理管中。

3、运行单细胞悬液制备仪中程序M-Adipose-Heater-1。

4、用润湿后的 100 μm细胞滤器过滤细胞悬液样本,50mL离心管收集细胞悬液。


单细胞测序前样本处理


实验结果反馈

得到细胞悬液后通过C100计数仪计数可见,使用传统研磨方法细胞碎片多,收集的液体容易发泡,仿佛是在磨豆浆。替换RWD单细胞悬液制备仪和酶解试剂盒后细胞碎片减少,细胞活率提升。


单细胞测序前样本处理

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