如何快速找到PCR最适合的退火温度?

如何快速找到PCR最适合的退火温度?

作者:RWD
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如何快速找到PCR最适合的退火温度?


PCR一般包括三个步骤: 变性,退火,延伸。

其中,退火过程中温度是非常是非常重要的一个参数,温度过高会导致产量降低、甚至得不到产物,温度过低又会导致非特异扩增。

梯度PCR是寻找最佳退火温度最简便的方式,一次实验可以同时设置12种不同的退火温度。利用梯度PCR仪,通过现有的引物熔解温度(Tm)设置温度区间。起始温度设置低于估算的Tm5°C,以2°C为增量,逐步提高退火温度。
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